琼脂糖电泳仪说明书琼脂糖电泳仪操作指南
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dna琼脂糖凝胶电泳实验现象?
DNA分子在琼脂糖凝胶中脉冲时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的ph溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
琼脂凝胶电泳怎么制胶?
1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.
2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.
电泳胶板怎么做?
根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺,根据分离分子的分子量确定浓度;加水加热融化,装好梳齿,合适温度加入显色剂(或者跑完电泳染色),倒胶板。以下为琼脂糖凝胶电泳的操作:
1 选择合适的水平式电泳槽,调节电泳槽平面至水平。检查稳压电源与正负极的线路;
2 选择孔径大小合适的点样梳子,垂直架在电泳胶模的一端,使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm;
3 按待分离DNA,配制相应浓度琼脂糖,100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀;
4 用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好,防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透。待琼脂糖凝胶冷却至50℃左右时,加入6μl核酸染料,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中,琼脂糖凝胶的厚度在3~5mm。倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去;
5 琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置20min,小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板,保持点样孔的完好;
6 将电泳胶模放入电泳槽中,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1~2mm。如点样孔内有气泡,用吸管小心吸出,以免影响加样;
7 将10μl DNA样品与2μl体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。上样缓冲液不仅可以提高样品的密度,使样品均匀沉到样品孔内,还可以使样品带颜色,便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置;
8 用微量移液器将样品小心加入加样孔内,记录样品点样秩序;
9 盖上电泳槽,开启电源开关,最高电压不超过5V/cm(100~150V恒压电泳),使DNA从负极向正极移动;
10 电泳时间随实验的具体要求而异。电泳一般需1~3小时。电泳完毕后关闭电源,戴一次性塑料手套取出凝胶,尽可能将所有的电泳缓冲液淋干,在254nm波长的透射紫外灯下观察。
琼脂糖凝胶电泳的电压设置成多少好?高了有什么坏处吗?
如果只是做鉴定,像pcr鉴定与酶切鉴定,可以将电压调大点,150左右就好;
如果是双酶切分离目标基因,为了让片段分开,就要相对的调小电压,70~80就好
琼脂糖凝胶电泳切胶之后如何保存?
是要回收条带么?割胶4°。为啥不直接回收呢?
其实就是一坨DNA,就按DNA的保存方法呗~~
~ 如果是想利用废胶,TEbuffer泡着,常温呗~~~